Лютеранство распространилось здесь в 30—-40-х годах XVI ст., сначала на западноукраинских землях, которые граничили с Польшей и Литвой. Центрами лютеранских влияний стали Вильна, Краков и Люблин. Лютеранство в Украине не имело большой популярности среди шляхты и народа, поскольку было преимущественно нимецькомовним и поддерживало монархию. Тем не менее польские и русские шляхтичи учились в лютеранских университетах, прежде всего в Виттенберзи. Так, Станислав Ориховський, учась там, жил в доме Лютера и приятелював с Меланхтоном. Меланхтон справил большое влияние и на Мартина Кровицького, который жил в Галиции.
Среди ведущих деятелей лютеранского движения в Польско-Литовском государстве были известные богословы и проповедники Еразм Гличнер (1528—1603), Ян Секлюциан (1510/1515—1578). В первой половине XVI ст. польское правительство обратилось к запретам лютеранской проповеди, конфискации литературы, осуждений.
Кальвинизм (реформатство) в Украине, в отличие от лютеранства, стал ведущей протестантской конфессией, в частности во второй половине XVI ст. От 40-х лет XVI ст. кальвинизм проникал в Украину вместе с иностранными учителями и проповедниками. Со временем между реформатов появились литовке, белорусы, украинце — переводчики, литераторы: Фома Фальковський, Павел Зенович, Николай Житний, Александр Витрелин.
Одной из ключевых фигур протестантского движения в украинско-белорусских землях был Симон Будний — переводчик, богослов, полемист. Кальвинизм распространяли магнаты и шляхтичи, которые обнимали государственные должности и как патроны материально помогали реформаторским общинам - «собранию», школам, типографиям. Главным патроном кальвинистов в Вещи Посполитий была династия князей Радзивиллив.
В Украине кальвинизм распространялся в Галиции, Холмщине, Пидляшши, Берестейщине, на Волыни, Подолье, Брацлавщини и Киевщине. Основная масса общин, школы и типографии были сосредоточены в западноукраинских землях. Реформатские общины составляло местное население - поляки, русины, литовце. Тому кальвинизм довольно гибко адаптировался к регионально-национальным особенностям, приобретал местные признаки в культовой практике, языку проповедей, в литературе, шкильництви. Кальвинисты писали и выдавали многочисленные полемические произведения, катехизисы, библейские переводы, проповеди и т.п.. Они упорядочивали богослужебную практику, заботились об укреплении единой протестантской церковной организации.
Вместе из православными кальвинисты определенное время защищали религиозные и гражданские права некатоликов. В периоды особой опасности общность православных с кальвинистами поздравляло даже украинское казачество. Период сотрудничества длился с 90-конца х лет XVI-гo к 30-начала х лет XVII ст. Тем не менее тактический православно-протестантський политический союз существовал недолго. Накануне Хмельнитчины культурное и социальное расхождения двух конфессий стали очевидными.
Конец XVI - начало XVII ст. считается периодом постепенного угасания активности реформаторских общин. В 50- 60-х годах XVII ст. их деятельность в большинстве регионов Украины почти прекратилась. Окончательный упадок протестантизма припал на друге половину XVII - начало XVIII ст. Украина была эпицентром военных конфликтов, ее территорию поделили соседние государства. Кризис экономики и культуры трагически обозначился на протестантизме. Он утратил поддержку господствующего слоя. В это время появился ряд антипротестантских решений польского правительства. В начале XVIII ст. в Украине действовали лишь одиночные лютеранские и кальвинистские общины.